近日，中國科學院合肥物質院健康所基因組學團隊張帆研究員與哈爾濱工業(yè)大學生命科學和醫(yī)學學部黃志偉教授團隊在乙型肝炎病毒研究方面取得新進展，深入探討了乙型肝炎病毒（HBV）不同臨床發(fā)展階段免疫表型動態(tài)轉變的細胞和分子調控網(wǎng)絡（圖1），為慢性乙型肝炎的免疫治療策略提供了重要理論依據(jù)。相關論文在Science Bulletin?期刊在線發(fā)表。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球肝病相關發(fā)病和死亡的主要病因之一。絕大多數(shù)成人感染HBV后可發(fā)展為急性感染（AHB）且常能自愈，但嬰幼兒和兒童往往發(fā)展為慢性乙肝（CHB），病程高度異質，通常分為免疫耐受期（IT）、免疫活躍期（IA）和非活躍慢性感染期（ICI）。盡管已有研究揭示了乙肝免疫反應的某些機制，但乙型肝炎不同臨床階段的免疫表型轉變過程尚不明確。因此，該研究對乙肝感染不同臨床階段的18名肝炎患者和3名健康對照個體的肝臟活檢樣本和外周血單核細胞樣本進行了單細胞RNA、TCR/BCR測序，旨在探討不同階段的免疫特征及其對疾病治療的啟示。

該研究系統(tǒng)描繪了乙型肝炎不同發(fā)展階段肝內及外周的單細胞圖譜，闡明了CD8+T細胞亞群分化與功能狀態(tài)在乙型肝炎中的作用、DC-SIGN+巨噬細胞的雙重免疫表型與免疫抑制環(huán)境、HBV感染中肝細胞亞型差異與免疫耐受機制及免疫活躍期（IA）體液免疫應答與中性粒細胞的免疫調節(jié)作用等關鍵機制。為開發(fā)靶向免疫抑制（如PD-1/IL-10通路）或增強細胞毒性（如IL-2療法）的新型治療策略提供了科學依據(jù)。

1.?CD8+T細胞亞群分化與功能狀態(tài)在乙型肝炎中的作用

研究發(fā)現(xiàn)，肝組織內CD8+T細胞可分為GZMK+（具有FasL/Fas通路介導的細胞毒性）和GZMB+（具有GZMB-perforin通路介導的細胞毒性）兩大亞群，其中GZMK+T細胞在AHB和IA階段顯著擴增，并通過FasL/Fas介導的細胞毒性參與免疫應答。擬時序分析揭示了外周血浸潤到肝組織的T細胞（hpCTLs）的三類狀態(tài)：早期分化態(tài)（State1，GZMB+PRF1+?CTLs）、短壽命效應態(tài)（State2：KLRG1+?CTLs）和耗竭態(tài)（State3：GZMK+PDCD1+?CTLs），其中State3在IA階段占比最高（68.8%），提示耗竭表型與疾病進展相關。研究揭示了GZMK+和GZMB+?hpCTLs在乙型肝炎病毒清除或持續(xù)感染中的潛在作用，并發(fā)現(xiàn)FasL/Fas介導的細胞毒性、CD28共刺激以及耗竭狀態(tài)可能是決定hpCTLs病毒清除功能的關鍵因素。

2.?DC-SIGN+巨噬細胞的雙重免疫表型與免疫抑制環(huán)境

研究發(fā)現(xiàn)肝內常駐的DC-SIGN+巨噬細胞在乙型肝炎免疫反應中的雙重免疫表型。這些巨噬細胞既可以作為抗原呈遞細胞（APC）通過響應IL-2刺激交叉激活T細胞，促進肝內免疫激活，也可以通過分泌IL-10和表達PD-L1抑制T細胞免疫，并通過CCL18-CCR8互作促進Treg細胞招募。DC-SIGN+巨噬細胞與其他細胞成分（如CSF1+ST2+肥大細胞、IL-33+肝竇內皮細胞和Treg細胞）共同構筑了肝內IA期的type?2免疫抑制環(huán)境。

3.?HBV感染中肝細胞亞型差異與免疫耐受機制??

研究還發(fā)現(xiàn)，中央靜脈周圍Hep1和門靜脈周圍Hep2兩類肝細胞對HBV感染和先天免疫反應的敏感性不同，門靜脈周圍肝細胞（Hep2）高表達HBV受體NTCP，感染率顯著高于中央靜脈周圍肝細胞（Hep1）（IT期：67% vs. 10.3%）。HBV感染的Hep2細胞通過下調共刺激分子（如CD80/CD86）導致T細胞功能缺陷，可能與IT階段的免疫耐受相關。 ?

4.?免疫活躍期（IA）體液免疫應答與中性粒細胞的免疫調節(jié)作用?

IA階段患者表現(xiàn)出強烈的體液免疫應答，?漿細胞和IgG1抗體水平顯著升高，這可能與濾泡輔助性T細胞（Tfh）分泌的IL-21密切相關。 空間轉錄組分析顯示，中性粒細胞通過CXCR2-CXCL2/3/6/8軸在AHB和IA階段富集，并且通過前列腺素PGE2-EP4信號通路來抑制T細胞功能從而加劇IA階段的免疫損傷。 ?

該論文的通訊作者是健康所張帆研究員和哈爾濱工業(yè)大學黃志偉教授。該工作由騰訊基金會科學探索獎和新基石科學基金會資助。

論文鏈接https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/40175178/

圖1?實驗設計和乙肝不同臨床分期的細胞免疫表型及分子機制解析圖